细胞培养过程中环境污染的发生可能由多种因素导致，主要包括以下几个方面：
1.不洁的动物组织标本：动物组织在取材时可能不小心被污染，特别是如果组织本身含有细菌且未经适当的抗生素处理，就会成为污染源。
2.空气中的微生物：空气中含有大量的微生物，如果操作室与外界隔离不严或消毒不充分，很容易造成污染。特别是春夏季南方地区多雨，空气湿度大，含菌量多，工作不注意也易造成污染。
3.清洗消毒不彻底：培养用物品、材料洗刷不净，或者培养用液和器材灭菌不彻底，也会引入微生物和有毒物质。
4.操作不当：操作者在操作过程中的多种行为都可能导致污染，如使用前未仔细检查器材和溶液是否已消毒灭菌，或者虽经处理但时隔已久又未重新处理；操作者未戴口罩、帽子，呼出气中可能排出细菌和支原体；培养瓶口未用75%酒精擦拭和烧灼；操作者不小心将吸管或无菌器具碰到了污染的物品等。
5.培养条件不当：包括操作不严谨如不遵循无菌操作规程、器皿污染如使用未经彻底清洁和灭菌的培养器皿等，都可能引入细菌。
6.培养基制备和储存问题：培养基制备不当或长时间保存可能受到空气中的微生物污染。
7.实验室环境卫生差：实验室的环境卫生直接关系到细胞培养的成功与否。不定期的实验室清洁和消毒工作是预防细菌污染的关键。
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