细胞培养被支原体污染是极普遍的问题，面对支原体污染给细胞培养带来的巨大难题，世界各国开始重视，并相继建立了细胞库，对细胞质量进展控制，效果显著，支原体污染的问题得以限制。目前已知能污染细胞的支原体有20多种以上，其中95％以上的支原体污染是口腔支原体。
支原体是目前已知一类能在无生命培养基上生长繁殖的小的原核细胞微生物，分为两个属：一为支原体属，有几十个种；另一为脲原体属，仅有一种。革兰染色为阴性，但不易着色，一般用Giemsa染色，染成淡紫色。
支原体在自然界分布广泛，无细胞壁，直径为0.1-0.3μm，且形态易变，极易通过除菌过滤器。大部分支原体繁殖速度比细菌慢，适宜生长温度为35℃，适合于偏碱条件下生存（pH7.6—8.0），对酸耐受性差，对75%乙醇、煤酚皂溶液敏感。对热比较敏感在细胞培养过程中如果在显微镜下发现破碎的细胞很多，需要频繁换液才能维持传代培养的时候，即应怀疑支原体污染。细胞培养过程中遇到的支原体95%都来自于以下四种支原体：口腔支原体、精氨酸支原体、猪鼻支原体、莱氏无胆甾支原体，其中莱氏无胆甾支原体为牛源性。
支原体污染的来源？
（1）细胞之间交叉污染；
（2）细胞培养操作人员的口腔、皮肤等；
（3）工作环境或实验器材的污染；
（4）培养基的污染。
支原体污染的严重性
（1）细胞外形可以没有明显的变化，支原体可以与细胞共存，污染后细胞液不会死亡，培养基一般不发生浑浊；
（2）使用被支原体污染的细胞做实验会严重影响实验的结果，因为支原体会抑制细胞生长；导致染色体畸变；细胞膜抗原性改变；细胞复苏后存活率降低等。
（3）影响细胞的代谢和功能：培液中的精氨酸被支原体大量消耗，引起细胞蛋白质、DNA、rRNA、mRNA的合成障碍；支原体活动使培液成分发生改变（如发酵型支原体降解糖类产生酸性物质），影响细胞代谢。
（4）培养过程中细胞破碎较多，培养基pH变化明显，需要频繁更换新鲜培养基；
（5）细胞被支原体污染后会形成共生体系导致污染不断扩大。
细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染：
1）控制环境污染
2）严格实验操作
3）细胞培养基和器材要保证无菌
4）在细胞培养基中加入适量的抗生素
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